Blog da Sinapse

Premiados no Soterio do Stand da Sinapse na FesBE

22 de Agosto de 2008 @ 11:38 - André Herklotz
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Fotos do Nosso Stand da SBBq2008

25 de Maio de 2008 @ 19:13 - André Herklotz
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Caro Cliente,
Em nome da equipe da Sinapse Biotecnologia agradeço pela sua participação em nosso Stand.

Ver mais fotos

Veja o catálogo novo da Fermentas e suas novidades

11 de Abril de 2008 @ 16:43 - André Herklotz
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O catálodo 2008-2009 da Fermentas tráz várias novidades:
Kits para Real Time Sybr
Kits para Real Time para sondas marcadas
Nova marcador precorado de proteínas multicolorido
133 Enzimas Fast
Kit para dosagem de proteínas totais

Clontechniques Abril de 2008

4 de Abril de 2008 @ 19:59 - André Herklotz
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Periódico da Clontech edição de abril

Cuba de Eletroforese da Bioneer

4 de Abril de 2008 @ 13:29 - André Herklotz
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Veja as vantagens da Cuba da Eletroforese da Bioneer.

Capacidade:
Até 96 poços.

Flexibilidade:
Possibilidade de diferentes tamanhos de gel.
Quatro tipos de pentes inclusos.

Economia:
Já vem com uma mini-fonte para 50-100V.
Dimensões otimizadas para um menor gasto de material.
Preço reduzido

Termociclador em tempo real - Exicycler da Bioneer

18 de Fevereiro de 2008 @ 17:23 - André Herklotz
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Novo Termociclador Exicycler da Bioneer.
Uma exelente relação custo benefício com:
- bloco de 96 com gradiente
- 5 filtros
- detector CCD 2D
- lampada de excitação “short arc lamp” patenteada
Compare com outras opções do mercado.
Solicite uma visita técnica
Visite o nosso site para outros produtos

TrueStart: Maior rendimento ! Menor preço por reação !

26 de Outubro de 2007 @ 14:45 - André Herklotz
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TrueStart em promoção

Outras opções para PCR da Fermentas

Veja abaixo o protocolo otimizado pela Sinapse.

Experimentos de Validação dos produtos para RT PCR da Fementas

Figura 1

1 – Marcador de Peso Molecular GeneRuler 100bp Plus
2 - cDNA G1 – PCR 1 Platinum ( Made in Brazil ) 1u
3 - cDNA G1 - PCR 2 TrueStart 0,5u
4 - cDNA G1 - PCR 3 TrueStart 1u
5 - cDNA G1 - PCR 4 TrueStart 1,25u
6- cDNA G2 – PCR 1 Platinum ( Made in Brazil ) 1u
7 - cDNA G2 - PCR 2 TrueStart 0,5u
8 - cDNA G2 - PCR 3 TrueStart 1u
9 - cDNA G2 - PCR 4 TrueStart 1,25u
10 -cDNA G3 – PCR 1 Platinum ( Made in Brazil ) 1u
11 -cDNA G3 - PCR 2 TrueStart 0,5u
12 -cDNA G3 - PCR 3 TrueStart 1u
13 -cDNA G3 - PCR 4 TrueStart 1,25u
14 -cDNA G4 – PCR 1 Platinum ( Made in Brazil ) 1u
15 -cDNA G4 - PCR 2 TrueStart 0,5u
16 -cDNA G4 - PCR 3 TrueStart 1u
17 -cDNA G4 - PCR 4 TrueStart 1,25u
18 - Marcador de Peso Molecular GeneRuler 100bp Plus

Na figura 1 pode-se verificar um maior rendimento equivalente para os protocolos PCR1 e PCR2, Platinum e Truestart ( metade das unidade ) respectivamente. Os protocolo PCR3 apresentou rendimento substancialmente superior que o PCR1, mesma quantidade de polimerase.

Introdução

Com o objetivo de demonstrar a qualidade dos produtos fermentas, foram elaborados experimentos de RT PCR para detecção do gene de b-Actina em celulas Hela. As primeiras fitas de cDNA foram feitas pelos métodos de Random priming e Oligo dT18, utilizando-se as Enzimas superscript III ( Invitrogen ) e Revertaid RNAseH minus ( Fermentas ). A reação de PCR foi feita com Oligos para b-Actina ( Bioneer ), utilizando-se as Polimerases “Hot Start” Platinum ( Invitrogen ) e TrueStart ( Fermentas ). Incialmente as amplificações foram feitas de acordo com instruções do fabricante. Posteriormente foi feita uma titulação para comparação de rendimento entre as polimerases.

Metodologia

Amostra

Amostras de RNA (0,5ug/ul ) foram preparadas com Trizol a partir de celulas Hela em cultura.

RT- PCR

Para compreensão vamos subdividir os RT-PCR em 4 grupos como descrito abaixo.

Grupo 1 – Trancriptase Invitrogen – Oligo dT18

1ul Oligo dt18 ( 0,5ug/ul)
0,5ul RNA ( 2ug/ul )
1ul dNTP 10nM ( Fermentas )
H20 10,5ul
65 C 5’
Gelo

Adicione Mix
4ul 5X Buffer
1ul 0,1M DTT
1ul Rnase Out

Adicione 1ul Superscript III

42 C 60’
70 C 10’

Grupo 2 – Transcriptase Invitrogen Random Hexamer
1ul (0,2ug/ul )
0,5ul RNA (0,5ug/ul )
1ul dNTP 10mM
H20 10,5ul
65 C 5’
Gelo

Adicione Mix
4ul 5X Buffer
1ul 0,1M DTT
1ul Rnase Out

25 C 5’
1ul Superscript III
50 C 60’
70 C 15’
Gelo

Grupo 3 Revertaid RNAseH Oligo dT18

Protocol Oligo dt 18
1ul Oligo dt18 ( 0,5ug/ul)
0,5ul RNA ( 2ug/ul )
H20 10,5ul
70 C 5’
Gelo 1’

Add Mix
4ul 5X Buffer
1ul Ribolock
2ul 10mM dNTP

37C 5’
Add 1ul Revertaid
42C 60’
70 C 10’
Gelo

Grupo 4 – Revertaid RNAseH minus – Radom Hexamer

Protocol Random Hexamer
1ul Oligo dt18 ( 0,5ug/ul)
0,5ul RNA ( 2ug/ul )
H20 10,5ul

Adicione Mix
4ul 5X Buffer
1ul Ribolock
2ul 10mM dNTP

25C 5’
Add 1ul Revertaid
25C 10’
42C 60’
70 C 10’
Gelo

PCR - TrueStart
10x Buffer Tris, KCl 5ul
MgCl2 3ul
DNTP 10mM 1ul
Oligo Sense B-Actin 1ul
Oligo Antisense B Actin 1ul
Taq 0,25ul
H20 36,75

PCR - Platinum ( Made in Brazil )
10x Buffer Tris, KCl 5ul
MgCl2 1,5ul
DNTP 10mM 1ul
Oligo Sense B-Actin 1ul
Oligo Antisense B Actin 1ul
Taq 0,2ul
H20 38,30

Titulação

Cada um dos grupos foi amplificado segundo os 4 protocolos abaixo:

PCR 1 -

PCR - Platinum ( Made in Brazil )
10x Buffer Tris, KCl 5ul
MgCl2 1,5ul
DNTP 10mM 1ul
Oligo Sense B-Actin 1ul
Oligo Antisense B Actin 1ul
Taq 0,2ul
H20 38,30

PCR 2 -

PCR - TrueStart
10x Buffer Tris, KCl 5ul
MgCl2 3ul
DNTP 10mM 1ul
Oligo Sense B-Actin 1ul
Oligo Antisense B Actin 1ul
Taq 0,1ul
H20 36,90ul

PCR 3 -

PCR - TrueStart
10x Buffer Tris, KCl 5ul
MgCl2 3ul
DNTP 10mM 1ul
Oligo Sense B-Actin 1ul
Oligo Antisense B Actin 1ul
Taq 0,2ul
H20 36,80ul

PCR 4 -

PCR - TrueStart
10x Buffer Tris, KCl 5ul
MgCl2 3ul
DNTP 10mM 1ul
Oligo Sense B-Actin 1ul
Oligo Antisense B Actin 1ul
Taq 0,25ul
H20 36,75
Resultados

Como pode-se verificar pelas figura 1 o rendimento dos RT PCR foram utilizando-se Superscript e Revertaid, para os dois metodos. Pode-se notar ainda uma redução no rendimento para os RT-PCR amplificados com a Polimerase platinum.

Discussão

Os resultados mostraram uma performance equivalente entre as transcriptase reversas e superior da enzima polimerase TrueStart da Fermentas para a PCR de b-actina humana em Células Hela sobre a enzima Platinum fabricada no Brazil de Invitrogem.

Oligos purificado por cromatografia

12 de Janeiro de 2007 @ 12:03 - André Herklotz
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A Sinapse vem distribuindo com sucesso os oligos da empresa Bioneer. Além do preço a partir de R$ 2,00 por base, um dos melhores do mercado, a qualidade tem sido um dos fatores de sucesso. Os oligos da Bioneer são os únicos da sua categoria a serem purificados por cromatografia e analisados no Maldi-Tof.

Veja a tabela de rendimento em OD dos oligos.

Logistica de Produtos Biotecnológicos

11 de Dezembro de 2006 @ 09:40 - André Herklotz
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A Sinapse sempre esteve preocupada com a logística de seus produtos, que é um grande diferencial para entrega de seus produtos aos usuários finais. Nós não economizamos esforços para controlar as temperaturas de armazenagem de produtos perecíveis desde a saída do fabricante à porta do laboratório, para isso mantemos tanto no exterior quanto aqui no Brasil, pessoal treinado e altamente comprometido no manuseio de cada embarque caso a caso. Para nós a satisfação do cliente é a base de nosso trabalho. Sempre estamos verificando os nossos procedimentos a fim de que possamos assegurar os padrões de qualidade que oferecemos. Oferecer o melhor produto, mais rápido e mais barato ao cliente é a nosso foco no planejamento de nosso processo logístico.